（点击图片，了解至本血液肿瘤MRD验证数据）
1. 如何通过监测体内的血液肿瘤残留病灶，实现判断预后及复发监测？
2. 如何通过提高检测灵敏度实现血液肿瘤MRD的革新？
根据中国癌症登记中心数据显示，2019年我国血液肿瘤新增患者约20万人，血液肿瘤的发病率和死亡率有逐年增高的趋势，包括白血病、恶性淋巴瘤及多发性骨髓瘤等。很多血液肿瘤的患者，在接受了治疗之后，处于临床缓解期，看似没有临床症状，但实际上，体内仍然存在残留的少量血液肿瘤细胞。残留的血液肿瘤细胞因为数量很少，不会引起身体任何复发症状和表现，所以很难通过显微镜观察或追踪肿瘤标志物等传统临床方法检测出这些癌细胞，但它们很有可能导致癌症复发，从而影响患者的生存率及生活质量。
如何通过提高检测灵敏度实现血液肿瘤MRD的革新？
MRD主要指在治疗后体内持续存在的低于常规检测限的残留肿瘤细胞或者相关生物标志物。它有多种表述，微小残留病灶(Minimal Residual Disease)、可测量残留病灶（Measurable Residual Disease）和分子残留病灶（Molecular Residual Disease）。
BCR和TCR的V-D-J基因重排过程
（左图为抗原受体基因的V-D-J基因片段，右图为V-D-J基因重排）
正常淋巴细胞的V-D-J重排是随机的，表现为多克隆，具有发挥各种细胞免疫作用的潜能。而在淋巴细胞白血病、骨髓瘤或淋巴瘤发生过程中，某一个或几个特定的BCR或TCR基因重排的细胞发生恶性转化，导致在淋巴结、骨髓或外周血中出现主要的淋巴细胞克隆，表现为单克隆性。
B淋巴细胞发育分化过程中的BCR克隆重排
在过去的十几年中，多发性骨髓瘤（MM）患者的治疗得到极大改善，完全缓解（CR）率超过50%，但大部分患者仍会复发，因此需要比传统疗效标准更深层次的疗效评估标准。而MRD就是这一新的疗效标准，它能更敏感、更深层次反映疾病的缓解深度，且与疾病的预后密切相关。《中国多发性骨髓瘤诊治指南（2020年修订）》指出，多发性骨髓瘤（MM）患者应在完全缓解后进行MRD疗效评估，采用方法包括新一代流式（NGF）和新一代测序（NGS），MRD疗效标准共分为5种，包括持续MRD阴性、二代流式MRD阴性、NGS MRD阴性、原有影像学阳性的MRD阴性和MRD阴性后复发。
CSCO指南中急性淋巴细胞白血病（ALL）的缓解后分层治疗
2018年3月，FDA批准安进公司的Blincyto（贝林妥欧单抗）用于MRD阳性的前体B细胞急性淋巴细胞白血病（pre-B ALL）成人及儿童患者的治疗，成为首个也是唯一获FDA批准用于MRD阳性ALL的药物。
MRD阳性是指患者在治疗中或治疗后仍有残留的肿瘤细胞，是肿瘤复发的主要原因。MRD值越高，复发风险越大。由于技术的差异，不同技术下的MRD阴性和阳性之间有着不同的临界值。越灵敏的MRD检测技术越能更好地预示复发风险。
发表在2019年《Blood》的一项慢性淋巴细胞白血病（CLL）用氟达拉滨、环磷酰胺联合利妥昔单抗（FCR）方案一线治疗的研究中，对骨髓中多色流式（MFC，灵敏度10-4）MRD阴性的62例CLL患者，通过NGS技术（灵敏度10-6）检测其骨髓和外周血的MRD，发现75%的患者骨髓呈现NGS MRD阳性，45%的患者外周血呈现NGS MRD阳性；NGS MRD阴性的患者具有更长的无进展生存期[2]。
MRD不同状态下CLL患者的无进展生存曲线
（左图：骨髓NGS检测；右图：外周血NGS检测）
近日发表在《Blood Cancer Discovery》的一项急性淋巴细胞白血病（ALL）CAR-T治疗研究，对Tisagenlecleucel治疗后的143名儿童和青少年ALL患者应用多色流式（MFC）和NGS进行MRD检测，结果显示，骨髓样本的NGS-MRD在预测复发方面比MFC更准确，NGS-MRD阴性预示患者有更小的复发概率和更长的生存期，是用于预测CAR-T治疗复发风险的最敏感及最具可操作性的生物标志物[4]。
目前血液肿瘤的临床试验高度重视MRD监测。MRD正逐渐替代传统的评估方法，成为临床试验新的评估终点。在目前多发性骨髓瘤的临床试验中，90%以上有MRD评估，其中27%的临床试验将MRD阴性率作为主要终点，67%的临床试验作为次要终点[5]。
2020年1月，美国食品药品管理局（FDA）发布MRD作为血液肿瘤药物研发的指导文件《Hematologic Malignancies:Regulatory Considerations for Use of Minimal Residual Disease in Development ofDrug and Biological Products for Treatment Guidance for Industry》。
至本医疗重磅推出的MRD产品“觅源”是一款基于二代测序（NGS）技术的MRD动态监测产品，适用于淋系血液肿瘤。“觅源”可以在一管反应中检测BCR克隆重排（包括IGH VDJ重排, IGH DJ重排, IGK VJ重排, IGK KDE重排, IGL VJ重排, BCL1-IGH融合和BCL2-IGH融合）或TCR克隆重排（包括TRB VDJ重排和 TRG VJ重排），灵敏度可达10-6。其通过对淋系肿瘤（包括急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤和淋巴瘤）患者的骨髓液/外周血/组织等诊断样本进行BCR/TCR克隆重排检测，明确主克隆类型和其碱基序列；治疗后在医生建议的时间点对患者骨髓液/外周血进行BCR/TCR克隆重排检测，追踪诊断样本中所检测到的主克隆序列，用以临床预后判断、复发监测和指导治疗决策。
觅源NGS-MRD动态监测优势
对克隆重排进行监测，避免临床治疗介入后对细胞免疫抗原的影响。
基于NGS 的MRD动态监测，检测灵敏度高达10-6 - 10-7，能够更好的预测复发。
针对淋系血液肿瘤特殊性，增加重要融合基因BCL1-IGH 和BCL2-IGH 的检测和监测。
可在同一管中检测所有基因的重排类型，节约样本量。
参考文献:
[1] Nicholas JS, et al. Recommendations for the assessment and management of measurable residual disease in adults with acute lymphoblastic leukemia: a consensus of North American experts. Am J Hematol. 2019 February ; 94(2): 257–265
[2] Thompson PA, et al. Minimal residual disease undetectable by next-generation sequencing predicts improved outcome in CLL after chemoimmunotherapy. Blood. 2019 Nov 28;134(22):1951-1959.
[3] Takamatsu H, et al. A comparison of minimal residual disease detection in autografts among ASO-qPCR, droplet digital PCR, and next-generation sequencing in patients with multiple myeloma who underwent autologous stem cell transplantation. Br J Haematol. 2018 Nov;183(4):664-668）.
[4] Pulsipher MA, et al. Next-generation sequencing of minimal residual disease for predicting relapse after tisagenlecleucel in children and young adults with acute lymphoblastic leukemia. Blood Cancer Discov. 2022;3:1–16
[5] Burgos L, et al. Measurable residual disease inmultiple myeloma: ready for clinical practice? J Hematol Oncol. 2020 Jun22;13(1):82）
本文由 SEQ.CN 作者：白云 发表，转载请注明来源！
