近期，加州大学洛杉矶分校（UCLA）的研究人员从美国国家癌症研究所（NCI）获得了500万美元的UO1项目资助，计划在未来5年时间内进行新一代液体活检技术EFIRM的临床验证，用于肺癌患者的早期检测。据悉，该项目由UCLA口腔学院、David Geffen医学院和易活生物美国子公司(EZlife Bio Inc. 以下简称‘易活生物’）共同承担。

易活生物方面表示，该项目将从UCLA Ronald Reagan医疗中心和其他UCLA健康诊所就诊的肺癌风险患者获取血液和唾液样本，使用易活生物开发的 “电场诱导的释放与测量” （Electric Field-induced Release and Measurement，EFIRM）液体活检技术进行检测，并在一天内确定患者是否需要进行组织活检。采用EFIRM技术获得的患者唾液或血液检查结果将与影像学分析相结合，用于开发针对不明确肺部结节患者的诊断预测工具。易活生物将在这个项目中承担基于EFIRM技术检测方法的开发及技术支持工作。据了解，易活生物在前期已完成了基于EFIRM技术的针对非小细胞肺癌EGFR基因突变检测试剂盒的开发，并将为该项目进一步开发针对其他基因靶点的检测方法。

已有研究表明，利用EFIRM技术可从早期非小细胞肺癌患者的血液样本中准确检测出EGFR基因突变。在一项研究中，加利福尼亚大学研究人员联合其他机构的科学家收集了248例经影像学检查发现有肺部结节患者的血浆样本。其中，44例患者被诊断为I期或II期非小细胞肺癌（其中23例经组织活检证实为良性肺结节，21例为I期或II期腺癌）。他们利用EFIRM技术，在12个样本中的11个样本中检测到L858R突变，在9个样本中的7个样本中检测到19del突变。经数据分析，L858R检测灵敏度为92％， 19del检测灵敏度为77％，特异性都大于91％，在血浆和肺部结节组织活检检测结果的符合率为100%。该研究结果已于2018年10月8日在线发表于 Journal of Molecular Diagnostics杂志。

图：EFIRM技术对早期样品中p.l858r和exon19 del（EX19）突变的检测性能。 A和B：EX19样品（绿色），L858R样品（红色）和野生型（WT）样品（黑色）。 C和D：曲线下面积（AUC）。n = 9个EX19d样本； n = 13个L858R样品； n = 22个WT样品。

EFIRM技术是由易活生物开发的一项全新的分子检测技术。与其他基因检测技术相比，EFIRM技术具有两大优势：1. 对基因碎片具有优越的检测能力，PCR技术对80bp以下的片段检测效能成“断崖式”下降，而EFIRM技术对于20bp以上的目标就具有非常好的检测效能。因此，对于以ctDNA、miRNA、外泌体内容物为代表的基因碎片或短片段目标基因的检测，EFIRM技术具有独特优势。优越的短片段基因检测性能，使得EFIRM技术能够获取更多的ctDNA定量检测信息，具有更高的灵敏度与特异性，提高肿瘤早期诊断率，与组织检测符合率大幅提高。2. EFIRM技术具备多生物靶标联合检测能力，蛋白及核酸（包括DNA、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等）的联合检测可以在同一平台实现，特别适用于外泌体、感染性疾病及液体活检这些需要多生物靶标联合检测的项目。

作为一项新型液体活检技术，EFIRM技术在医疗健康、检验检疫等科学研究领域都取得了突破性进展。在肿瘤液体活检领域，EFIRM技术是世界上首个不需要DNA提取及PCR扩增就能从非小细胞肺癌患者血浆及唾液中检出EGFR基因突变的技术，无论是灵敏度（100%）、特异性（95%）以及与组织检测的符合率（97%），与现有的ARMS-PCR（灵敏度65.7-78.9%、特异性87-100%、符合率66.7-94.3%）、数字PCR（灵敏度65-80%、特异性100%、符合率86-88%）及NGS（灵敏度50-100%、特异性96%）技术相比都居于前列[2]。相关研究成果作为Clinical Cancer Research和American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine等知名期刊的封面文章发表。

在外泌体研究领域，采用EFIRM技术可实现外泌体的裂解、释放和检测，三位一体，成为新兴的高效率外泌体研究工具（EFIRM方法已经被Extracellular Vesicles: Methodsand Protocols, Methods in Molecular Biology收录）。在病原微生物的检测领域，EFIRM技术可在同一平台实现HIV核酸与蛋白（抗原&抗体）的联合检测，检测灵敏度高，其对HIV p24抗原的检测下限达到7.8pg/mL（检测线性范围0-10 ng/mL），优于目前的第四代ELISA试剂，能够缩短HIV感染检出窗口期，满足HIV筛查、早期诊断及疗效评价的临床需求。与传统ELISA技术相比，EFIRM技术还可以大幅度降低抗体用量，降低检测成本。该检测技术简便快速，可实现现场即时检测，有望成为下一代病原微生物快速检测平台。

整体而言，EFIRM技术具有快速、灵敏、低能耗、经济，易于微型化、集成化以及实现现场即时检测等优点，在分子检测及诊断领域具有广泛应用前景。易活生物表示，作为EFIRM技术的开发者，公司将持续进行EFIRM技术的应用开发，并为IVD企业和新药研发企业提供包括新药靶点验证、伴随诊断试剂盒开发、定制化试剂盒开发、基因检测设备及试剂耗材供应在内的分子诊断整体解决方案。

参考资料：

[1] Electric Field–Induced Release and Measurement Liquid Biopsy for Noninvasive Early Lung Cancer Assessment.

[2] Sholl LM, Aisner DL, AllenTC,et al. Liquid Biopsy in Lung Cancer: A Perspective From Members of the Pulmonary Pathology Society. Arch Pathol Lab Med.2016;140(8):825-9.